?電泳怎么裝

電泳怎么裝

    在蛋白質(zhì)和核酸分析的實(shí)驗(yàn)中，電泳是所需一步。然而對(duì)于許多實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō)，面對(duì)一堆玻璃板、膠框和電極線，常溫的一個(gè)問(wèn)題就是：電泳怎么裝？本文將手把手教您掌握垂直電泳槽的安裝方法，無(wú)論您是使用自配膠還是預(yù)制膠，都能輕松應(yīng)對(duì)。

一、安裝前的準(zhǔn)備：清洗與檢查

    在正式講解電泳怎么裝之前，有兩項(xiàng)準(zhǔn)備工作。

    清洗玻璃板與配件

    玻璃板的潔凈度直接影響凝膠質(zhì)量和電泳效果。組裝前，必須用泡沫海綿沾少許中性洗滌劑清洗玻璃板，尤其是與凝膠接觸的內(nèi)側(cè)面。清洗后放在支架上自然晾干，切勿用手指接觸灌膠面，以免留下油脂影響凝膠聚合。

    檢查密封件與電極

    檢查凹型橡膠框是否有老化或變形，確保密封條完整無(wú)損。同時(shí)觀察電極絲是否有氧化痕跡，若有氧化可用細(xì)砂紙輕輕打磨恢復(fù)導(dǎo)電性。

二、自配膠的安裝方法（經(jīng)典夾芯式）

    對(duì)于使用自配聚丙烯酰胺凝膠的用戶，以下是標(biāo)準(zhǔn)的電泳怎么裝操作流程。

    首要步驟：組裝玻璃板與橡膠框

    將四只固定螺桿插入一只貯液槽框（半上槽）的對(duì)應(yīng)孔洞中，將貯液框仰放在桌上。

    左手拿凹型橡膠框，右手拇指與中指捏住玻璃板兩側(cè)邊緣，輕輕插入橡膠框內(nèi)。注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板。

    將帶有玻璃板的橡膠框放在仰放的貯液槽框架上，確保下緣對(duì)齊。

    第二步：合攏與固定

    雙手拿起另一只貯液槽框，與仰放的貯液槽框相合，使橡膠框上的凸出線位于有機(jī)玻璃框中間。裝上四只螺母，按斜角位置雙雙逐漸擰緊，確保用力均勻，防止玻璃板受力不均而破裂。

    第三步：封底邊（關(guān)鍵步驟）

    將組裝好的電泳槽垂直豎起。在長(zhǎng)玻璃板與橡膠框之間的縫隙處，用熔化的10%瓊脂沿長(zhǎng)玻璃板下端灌入封底。為防止留存氣泡，可稍抬起一端即可趕去氣泡。待瓊脂凝固后才能灌膠。

    第四步：灌膠與插梳子

    用細(xì)頭滴管吸取配好的分離膠，沿長(zhǎng)、短玻璃板中間縫隙從一端加入。為防止氣泡，可稍抬起另一端使氣泡往高處走。

    加膠量至距離短玻璃板上端約0.3厘米處，輕輕加少許水封面。

    雙手輕輕將梳子插入，待膠凝固后即可看到清晰的加樣孔。

三、預(yù)制膠的安裝方法（更快捷的選擇）

    使用預(yù)制膠可以省去配膠和灌膠的步驟，但電泳怎么裝同樣有講究。

    首要步驟：撕膠帶與拔梳子

    從包裝袋中取出預(yù)制膠，先將膠板底部的藍(lán)色膠帶撕去，然后將梳子按箭頭方向從膠板中平穩(wěn)地平行推出。

    第二步：檢查密封條

    有些電泳槽的U型密封膠條頂部有突起結(jié)構(gòu)，電泳前需將具有突起結(jié)構(gòu)的密封膠條取出后反向安裝，使平坦面朝外，從而防止漏液。

    第三步：安裝預(yù)制膠

    將預(yù)制膠安裝到電泳槽中。關(guān)鍵要點(diǎn)：確保膠板底部開(kāi)口位于電泳裝置密封膠條下方，不能被密封膠條遮擋，否則電流無(wú)法通過(guò)。

    第四步：加緩沖液與沖洗加樣孔

    向內(nèi)槽加入足量電泳緩沖液，液面需浸沒(méi)加樣孔并高出5-7mm。向外槽也加入緩沖液至適當(dāng)高度。

    重要提示：確保外槽液面低于內(nèi)槽液面，不可漫過(guò)膠板上沿，否則會(huì)造成短路。

    用注射器吸取緩沖液，輕輕沖洗加樣孔，去除氣泡和殘留的儲(chǔ)存緩沖液。

四、加樣與電泳設(shè)置

    無(wú)論使用自配膠還是預(yù)制膠，接下來(lái)的步驟都相同。

    加樣操作

    將處理好的蛋白樣品或DNA樣品與上樣緩沖液混合。

    用微量加樣器吸取樣品，斜角45°對(duì)準(zhǔn)加樣孔底部緩慢推液，避免產(chǎn)生氣泡，也避免針頭戳破膠孔。

    每孔上樣量需控制：蛋白電泳5-20μg，核酸電泳10-50ng為宜。

    連接電源

    將電泳槽導(dǎo)線與電泳儀電源連接：紅色接正極，黑色接負(fù)極。注意蛋白電泳時(shí)上樣孔側(cè)為負(fù)極。

    檢查線路無(wú)誤后，蓋上電泳槽蓋（具備開(kāi)蓋斷電安全功能）。

    設(shè)置電泳參數(shù)

    蛋白電泳：濃縮膠階段用80V，待溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后調(diào)至120-150V。

    核酸電泳：恒壓5-10V/cm凝膠長(zhǎng)度。

    電泳至指示劑到達(dá)凝膠底部適當(dāng)位置時(shí)停止。

五、常見(jiàn)安裝問(wèn)題與排查

    問(wèn)題1：漏膠或漏液

    可能原因：玻璃板底部未對(duì)齊、密封條老化、螺母未擰緊。

    解決方案：檢查玻璃板底部是否平齊，重新按對(duì)角順序均勻擰緊螺母，或更換密封條。

    問(wèn)題2：加樣孔變形

    可能原因：凝膠未凝固時(shí)插梳子，或拔梳子動(dòng)作過(guò)快。

    解決方案：延長(zhǎng)凝膠凝固時(shí)間，拔梳子時(shí)應(yīng)垂直平穩(wěn)拔出，切勿左右搖晃。

    問(wèn)題3：電泳時(shí)條帶歪斜

    可能原因：凝膠凝固不均、電極污染或緩沖液液面不等高。

    解決方案：清洗電極，確保內(nèi)外槽液面符合要求。

總結(jié)

    電泳怎么裝看似復(fù)雜，但只要掌握核心要點(diǎn)，就能輕松應(yīng)對(duì)：玻璃板要潔凈、密封要嚴(yán)實(shí)、電極連接要正確、液面高度要適宜。無(wú)論是自配膠還是預(yù)制膠，遵循規(guī)范的操作流程，都能獲得清晰可靠的條帶結(jié)果。初次操作時(shí)建議在實(shí)驗(yàn)記錄本上標(biāo)注正負(fù)極方向和關(guān)鍵步驟，熟能生巧后，電泳安裝將成為您得心應(yīng)手的常規(guī)操作。

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