?電泳的基本原理是什么

電泳的基本原理是什么

    在生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里，電泳是一項(xiàng)核心技術(shù)，用于分離蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子。許多實(shí)驗(yàn)人員每天都在使用這項(xiàng)技術(shù)，但對(duì)其背后的原理未必清晰。本文將深入淺出地解析電泳的基本原理，幫助您從本質(zhì)上理解這一重要工具。

一、什么是電泳？從現(xiàn)象到技術(shù)

    在探討電泳的基本原理之前，我們先明確它的定義。

    電泳（Electrophoresis）是指帶電顆粒在電場(chǎng)作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。這個(gè)現(xiàn)象本身是自然界中存在的物理化學(xué)過(guò)程，而電泳技術(shù)則是利用這一現(xiàn)象，將混合物中各組分進(jìn)行分離的方法。

    可以這樣理解：電泳的基本原理就像是一場(chǎng)在電場(chǎng)中進(jìn)行的“賽跑"。不同的帶電顆粒帶著不同數(shù)量的電荷，有著不同的大小和形狀，它們?cè)陔妶?chǎng)力的驅(qū)動(dòng)下向前奔跑，速度快的跑在前面，速度慢的落在后面，最終彼此拉開(kāi)距離，實(shí)現(xiàn)分離。

二、核心基礎(chǔ)：分子為什么會(huì)帶電？

    理解電泳的基本原理，首先要明白一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題：生物分子為什么會(huì)在溶液中帶電？

    蛋白質(zhì)的兩性電解質(zhì)特性

    蛋白質(zhì)分子由氨基酸組成，而氨基酸是典型的兩性電解質(zhì)。在溶液中，氨基酸可以解離為：

    帶正電荷的氨基（-NH??）

    帶負(fù)電荷的羧基（-COO?）

    因此，蛋白質(zhì)分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量，主要取決于溶液的pH值。

    等電點(diǎn)的概念

    對(duì)于每一種蛋白質(zhì)，都存在一個(gè)特定的pH值，此時(shí)其正負(fù)電荷數(shù)恰好相等，凈電荷為零，這個(gè)pH值稱為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（pI）。

    在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)不帶電荷，在電場(chǎng)中不會(huì)移動(dòng)。而當(dāng)溶液pH發(fā)生變化時(shí)：

    當(dāng)溶液pH>pI時(shí)，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)

    當(dāng)溶液pH<pI時(shí)，蛋白質(zhì)分子帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)

    核酸的帶電特性

    核酸（DNA和RNA）與蛋白質(zhì)類似，也是兩性電解質(zhì)。但由于其磷酸基的酸性比堿基的堿性強(qiáng)，在中性或偏堿性的溶液中，核酸分子通常表現(xiàn)為酸性，帶負(fù)電荷，因此在直流電場(chǎng)中向正極泳動(dòng)。

三、核心驅(qū)動(dòng)：電場(chǎng)力與遷移速度

    電泳的基本原理中，驅(qū)動(dòng)粒子運(yùn)動(dòng)的力來(lái)自電場(chǎng)。

    電場(chǎng)強(qiáng)度的影響

    帶電顆粒在電場(chǎng)中受到的力（F）等于其所帶凈電荷量（Q）與電場(chǎng)強(qiáng)度（E）的乘積：

    F=Q×E

    電場(chǎng)強(qiáng)度越大，帶電粒子受到的電場(chǎng)力越大，泳動(dòng)速度越快。根據(jù)電場(chǎng)強(qiáng)度，電泳可分為：

    常壓電泳（2-10V/cm）：電壓100-500V，適合分離蛋白質(zhì)、核酸等大分子，時(shí)間數(shù)小時(shí)到數(shù)天

    高壓電泳（50-200V/cm）：電壓2000-10000V，適合分離氨基酸、多肽、核苷酸等小分子，時(shí)間僅需幾分鐘

    遷移率的概念

    當(dāng)粒子在電場(chǎng)中穩(wěn)定運(yùn)動(dòng)時(shí)，所受的電場(chǎng)力與溶液介質(zhì)的阻力達(dá)到平衡。此時(shí)，粒子的電泳遷移率（μ）可用以下公式表示：

    μ=v/E=Q/(6πrη)

    其中，v為泳動(dòng)速度，E為電場(chǎng)強(qiáng)度，Q為凈電荷量，r為粒子半徑，η為介質(zhì)粘度。

    這個(gè)公式揭示了電泳的基本原理的核心關(guān)系：粒子的遷移率與自身所帶凈電荷量成正比，與顆粒大小和溶液粘度成反比。

四、影響因素：不止是電場(chǎng)

    了解了電泳的基本原理后，還需知道哪些因素會(huì)影響分離效果。

    內(nèi)在因素

    粒子的電泳速度與其自身特性密切相關(guān)：

    凈電荷越多，速度越快

    顆粒越小，速度越快

    形狀越接近球形，速度越快

    對(duì)于DNA分子，線狀雙鏈DNA的相對(duì)分子量的常用對(duì)數(shù)與電泳速度成反比。而質(zhì)粒DNA的速度受空間構(gòu)象影響：閉環(huán)型>線型>半開(kāi)環(huán)型。

    外界因素

    1.溶液的pH值

    電泳時(shí)必須使用緩沖液保持穩(wěn)定的pH。pH決定了帶電粒子的解離程度和所帶電荷數(shù)量。選擇合適的pH，使欲分離物質(zhì)所帶電荷有較大差異，有利于分離。

    2.離子強(qiáng)度

    溶液的離子強(qiáng)度越高，帶電粒子周圍會(huì)聚集帶相反電荷的離子形成“離子氛"，降低顆粒帶電量，增加運(yùn)動(dòng)阻力，從而降低電泳速度。電泳通常選擇離子強(qiáng)度0.02-0.20mol/L。

    3.電滲作用

    在電場(chǎng)中，溶液對(duì)固體支持介質(zhì)的相對(duì)移動(dòng)稱為電滲。當(dāng)支持介質(zhì)表面帶電時(shí)，會(huì)吸引溶液中帶相反電荷的離子，使靠近支持介質(zhì)的溶液層相對(duì)帶電，在電場(chǎng)作用下發(fā)生移動(dòng)，同時(shí)攜帶顆粒一起移動(dòng)。這會(huì)影響粒子的表觀泳動(dòng)速度。

    4.焦耳熱

    電泳時(shí)電流通過(guò)會(huì)產(chǎn)生焦耳熱，其值與電流強(qiáng)度的平方成正比。熱量會(huì)導(dǎo)致：

    緩沖液溫度升高

    介質(zhì)粘度下降

    分子運(yùn)動(dòng)加劇

    分辨率下降

    嚴(yán)重時(shí)甚至可能融化瓊脂糖凝膠或燒焦聚丙烯酰胺凝膠。

五、總結(jié)：電泳的基本原理的核心要點(diǎn)

    電泳的基本原理可以概括為以下三個(gè)層次：

    首層（現(xiàn)象）：帶電顆粒在電場(chǎng)中向相反電極移動(dòng)。

    第二層（機(jī)制）：顆粒的遷移速度取決于其所帶電荷量、顆粒大小和形狀，以及溶液性質(zhì)（pH、離子強(qiáng)度、粘度）和電場(chǎng)強(qiáng)度。

    第三層（應(yīng)用）：利用不同顆粒遷移速度的差異，將混合物中各組分彼此分離，用于后續(xù)的分析或鑒定。

    理解電泳的基本原理，不僅能幫助您更好地操作電泳實(shí)驗(yàn)，還能在遇到問(wèn)題時(shí)（如條帶拖尾、分辨率低）快速找到原因并優(yōu)化條件。無(wú)論是進(jìn)行蛋白質(zhì)SDS-PAGE，還是DNA瓊脂糖凝膠電泳，其背后的科學(xué)邏輯都是相通的。

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